活性氧检测试剂盒(绿色荧光)

更新:2022-10-25 17:32:58

中文名:活性氧检测试剂盒(绿色荧光)说明书下载暂无
英文名:Reactive Oxygen Species Assay Kit
描述:活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit,也称ROS Assay Kit)试剂盒采用 DCFH-DA (2,7-dichlorofluorescin diacetate)探针方法,是迄今最常用、最灵敏的细胞内活性氧检测探针。活性氧包括超氧自由基(O2•−)、过氧化氢(H2O2)、羟基自由基(•OH)、过氧亚硝基(ONOO−)、一氧化氮(•NO)等,它们参与了细胞增殖生长、发育分化、衰老和凋亡等许多生理和病理过程。 DCFH-DA 没有荧光,进入细胞后可以被酯酶水解为不能透过细胞膜的 DCFH(dichlorofluorescin),当活性氧存在时,DCFH 被氧化为强绿色荧光物质 DCF(dichlorofluorescein),荧光在激发波长 502 nm,发射波长 530 nm 附近有最大波峰,荧光水平与细胞内活性氧水平成正比。本试剂盒提供的活性氧检测系统本底水平低,灵敏度高,重复性好,操作简便。
订购信息
    货号规格价格品牌
    G2716-1>100次380GBCBIO
    G2716-2>500次1280GBCBIO
    G2716-3>1000次1950GBCBIO
产品介绍

    产品简介:

     活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit,也称ROS Assay Kit)试剂盒采用 DCFH-DA (2,7-dichlorofluorescin diacetate)探针方法,是迄今最常用、最灵敏的细胞内活性氧检测探针。活性氧包括超氧自由基(O2•)、过氧化氢(H2O2)、羟基自由基(•OH)、过氧亚硝基(ONOO−)、一氧化氮(•NO)等,它们参与了细胞增殖生长、发育分化、衰老和凋亡等许多生理和病理过程。 DCFH-DA 没有荧光,进入细胞后可以被酯酶水解为不能透过细胞膜的 DCFH(dichlorofluorescin),当活性氧存在时,DCFH 被氧化为强绿色荧光物质 DCF(dichlorofluorescein),荧光在激发波长 502 nm,发射波长 530 nm 附近有最大波峰,荧光水平与细胞内活性氧水平成正比。本试剂盒提供的活性氧检测系统本底水平低,灵敏度高,重复性好,操作简便。

    产品特点:

    l    适用范围:贴壁细胞、悬浮细胞、新鲜动物组织

    l  工作波长:最佳激发波长 500(500±15 nm),最佳发射波长 525 (530±20nm),也可按照 FITC 荧光检测条件检测

    l    所需设备:流式细胞仪、荧光酶标仪、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计等

    储存和稳定性:

    -20℃避光冻存。本试剂盒自订购之日起一年内有效。

    试剂盒组成:

    货号

    G2716-1

    G2716-2

    G2716-3

    DCFH-DA(10mM)

    0.1ml

    0.5ml

    1ml

    活性氧阳性对照(Rosup, 1M)

    0.1ml

    0.5ml

    1ml

    说明书

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    注意事项:

    l  探针装载后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。

    l  探针装载完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的装载情况是否良好。

    l  尽量缩短探针装载后到测定所用的时间(刺激时间除外),以减少各种可能的误差。

    l  本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作

    使用说明:

    一、 细胞样本:

    A.收集细胞,进行活性氧测定

    1.       细胞收集:

    悬浮细胞:2000rpm,离心5min,收集沉淀,用 0.01M PBS 或无血清培养液洗涤2次,1000rpm,离心5min,弃上清,取细胞沉淀;

    贴壁细胞:吸去培养液,用0.01M PBS或无血清培养液反复吹打,使细胞层全部进入 PBS 或培养液中,收集细胞悬液,用 0.01M PBS 或无血清培养液洗涤2次,1000rpm,离心5min,弃上清,取细胞沉淀;

    2.       DCFH-DA探针稀释。根据预实验的结果,用无血清培养基或者PBS将DCFH-DA探针稀释成工作液(提供的初始浓度为10mM)。

    注意:DCFH-DA工作液浓度可在100 nM~20 μM范围内,需进行预实验确定最适浓度,一般情况下10 μM DCFH-DA工作液能取到理想效果。如要获得10 μM DCFH-DA工作液10ml,取10μl M DCFH-DA (10mM)加入到10ml无血清培养或PBS中混匀即可。

    3.       加入DCFH-DA探针,用稀释好的 DCFH-DA 荧光探针重悬细胞沉淀,一般情况下,细胞密度要求1*106-2*107/ml。 并设置阴性与阳性对照。

    阴性对照:不加探针,只加入 PBS 或培养基的细胞。

    阳性对照:已加入DCFH-DA 荧光探针,并加入活性氧供体的细胞悬液,推荐试剂工作浓度0.1mM(该浓度可以根据预实验调整)。

    4.       37℃孵育细胞20-60分钟。通常情况下,20-30分钟即可。

    注意:孵育时间长短与细胞类型、刺激条件、DCFH-DA浓度等有关。可以每隔 5min颠倒混匀一下,使探针与样本充分接触。

    5.       1000g,离心5min,去上清收集细胞沉淀,用 PBS 缓冲液洗涤2次,重悬细胞。

    6.       进行荧光检测,以荧光度数值表示结果。

    B. 不收集细胞,直接将探针加入培养基测定

    1.        DCFH-DA探针稀释。根据预实验的结果,用无血清培养基或者PBS将DCFH-DA探针稀释成工作液(提供的初始浓度为10mM)。

    注意:DCFH-DA工作液浓度可在100 nM~20 μM范围内,需进行预实验确定最适浓度,一般情况下10 μM DCFH-DA工作液能取到理想效果。如要获得10 μM DCFH-DA工作液10ml,取10μl M DCFH-DA (10mM)加入到10ml无血清培养或PBS中混匀即可。

    2.        加入 DCFH-DA 探针,去除细胞培养基上清,加入稀释好的 DCFH-DA 探针,加入探针的体积以能盖住细胞为宜,通常 6 孔板单孔不少于 1ml。并设置阴性与阳性对照。

    阴性对照:不加探针,只加入培养基的细胞。

    阳性对照:已加入 DCFH-DA 荧光探针,并加入活性氧供体的细胞,推荐试剂工作浓度20-100 μM。

    3.        37℃孵育细胞20-60分钟。通常情况下,20-30分钟即可。

    注意:孵育时间长短与细胞类型、刺激条件、DCFH-DA 浓度等有关。可以每隔 5min 颠倒混匀一下,使探针与样本充分接触。

    4.        弃去上层培养液,用无血清培养液或 0.01M PBS 反复吹打,使细胞层全部进入 PBS 或培养液中。

    5.        收集细胞悬液,用 0.01M PBS 或无血清培养液洗涤2次,去除未进入细胞内的探针,1000rpm,离心5min,弃上清,收集细胞沉淀,用PBS缓冲液洗涤2次,重悬细胞。

    6.        进行荧光检测,以荧光度数值表示结果。

    二、动物组织样本

    1.        细胞悬液制备:可采用单细胞悬液制备仪或传统的组织处理方法如:酶解法、研磨法等制备单细胞悬液;

    2.        DCFH-DA探针稀释。根据预实验的结果,用无血清培养基或者PBS将DCFH-DA探针稀释成工作液(提供的初始浓度为10mM)。

    注意:DCFH-DA工作液浓度可在100 nM~20 μM范围内,需进行预实验确定最适浓度,一般情况下10 μM DCFH-DA工作液能取到理想效果。如要获得10 μM DCFH-DA工作液10ml,取10μl M DCFH-DA (10mM)加入到10ml无血清培养或PBS中混匀即可。

    3.        加入 DCFH-DA 探针,用稀释好的 DCFH-DA 荧光探针重悬细胞沉淀,并设置阴性与阳性对照。

    阴性对照:不加探针,只用0.01M PBS 重悬的细胞。

    阳性对照: 已加入 DCFH-DA 荧光探针,并加入活性氧供体的细胞悬液,推荐试剂工作浓度 20-100 μM。

    4.        37℃孵育细胞20-60分钟。通常情况下,20-30分钟即可。

    注意:孵育时间长短与细胞类型、刺激条件、DCFH-DA 浓度等有关。可以每隔 5min 颠倒混匀一下,使探针与样本充分接触。

    5.        1000g,离心 5min,去上清收集细胞沉淀,用 PBS 缓冲液洗涤 2 次,重悬细胞.

    进行荧光检测,以荧光度数值表示结果。

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