产品简介：

Cell Counting Kit-8，简称CCK-8试剂盒或CCK8试剂盒，是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

产品特点：

※使用水溶性四唑盐与水溶性甲臜染料，因此无需DMSO换液操作步骤。

※与其他水溶性四唑盐法（XTT，MTS）相比，灵敏度更高的同时毒性更低

※方便：单一溶液无需其他试剂

※酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响

储存和稳定性:

4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存两年有效。

试剂盒组成:

注意事项：

※本试剂盒的检测依赖于脱氢酶的催化反应，因此当检测体系中有还原性物质存在时，会干扰测定。

※由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。

※用酶标仪检测之前，要确保每个孔内没有气泡，否则会影响测定。

※加入 CCK-8 试剂后，培养时间要根据不同的细胞种类、数量和细胞状态来确定。通常情况下， 相同的培养时间，悬浮细胞和贴壁细胞相比，吸光度较低，可以延长培养时间或者增加细胞数 量。此外，白细胞可能也需要较长的培养时间。

※本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

※为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

1.       使用与酶标仪相匹配的 96 孔培养板。通常进行细胞增殖实验时，每孔加 100 微升 2000 个细胞，而测定细胞毒性时，每孔加100微升5000个细胞，应根据所用的细胞类型、增殖速度进行调整。注意设置 2-3个重复孔，并按照实验需要设置实验组与对照组，按要求进行培养并给予特定的药物刺激。

2.       处理结束后，向每孔加入 10μl CCK-8试剂（如果起始的培养体积为200微升，则需加入20微升CCK-8溶液）。可以用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。

3.       37 oC培养箱内孵育0.5-4小时，培养时间的长短依据细胞种类、数量、活力等情况而定，大多数情况孵育1小时即可。初次实验者，可以选择几个不同的培养时间点如 0.5h, 1h, 2h, 4h 用酶标仪进行检测，以便选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

4.       在 450nm 测定OD吸光度并进行计算。如无 450nm 滤光片可用 430-490nm 范围内的滤光片。注意：若样品为浑浊的细胞悬液时，可以选用大于 600nm 的波长，如 650nm 作为参比波长进行双波长测定。 注意：用酶标仪检测之前，要确保每个孔内没有气泡，否则会影响测定。

5.       结果判断：细胞增殖或毒性＝100％ × (OD_实验－OD_空白) / (OD_对照－OD_空白)

OD_实验：实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质)

OD_空白：空白孔(不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8)

OD_对照：对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质)