粪便RNA提取试剂盒

更新:2022-8-8 11:29:36

中文名:粪便RNA提取试剂盒说明书下载暂无
英文名:Stool RNA Kit
描述:检测粪便中病原菌等微生物、以及一些未消化食物样品的RNA是现代诊断的重要手段。由于粪便中存在大量抑制因子,常规的RNA纯化方式不能有效地去除这些杂质,导致下游实验的失败,如PCR不能扩增出所需片段。Stool RNA Kit采用了简便的硅胶柱纯化方式和独特的溶液系统,能有效去除动物粪便中各种影响下游实验抑制因子,并能高效地回收粪便中的基因组DNA。一次可处理0.05-0.5g样品,纯化的DNA可直接用PCR等实验。
订购信息
    货号规格价格品牌
    D130550T780GBCBIO
    D1306100T1380GBCBIO
    D1307200T2480GBCBIO
产品介绍

    产品简介

    检测粪便中病原菌等微生物、以及一些未消化食物样品的RNA是现代诊断的重要手段。由于粪便中存在大量抑制因子,常规的RNA纯化方式不能有效地去除这些杂质,导致下游实验的失败,如PCR不能扩增出所需片段。Stool RNA Kit采用了简便的硅胶柱纯化方式和独特的溶液系统,能有效去除动物粪便中各种影响下游实验抑制因子,并能高效地回收粪便中的基因组DNA。一次可处理0.05-0.5g样品,纯化的DNA可直接用PCR等实验。

    试剂盒组成

    产品编号

    R1301

    D1305

    D1306

    D1307

    次数

    5

    50

    100

    200

    纯化柱子

    5

    50

    100

    200

    收集管

    5

    50

    100

    200

    Buffer RC1

    4ml

    30ml

    60ml

    120ml

    Buffer RC2

    1ml

    6ml

    12ml

    24ml

    Buffer RC3

    1ml

    6ml

    12ml

    24ml

    Buffer RC4

    1ml

    10ml

    16ml

    35ml

    Buffer RC5

    1ml

    20ml

    37ml

    65ml

    Glass Beads

    2ml

    20g

    40g

    80g

    Wash Buffer I

    2g

    30ml

    55ml

    110ml

    Wash Buffer II

    2

    13ml

    26ml

    26ml*2

    说明书

    1

    1

    1

    1

                     

    储存和稳定性

    室温保存,一年有效。Buffer RC2与Buffer RC3可能有沉淀产生,37℃水浴溶解后即可。

    实验前准备

    请详细阅读该手册并熟悉各个步骤,在开始之前准备好所有的试剂盒组分和必需的器材。

    试剂准备:

    缩的RNA Wash Buffer II 需用无水乙醇按如下稀释:

    R1301 加8 ml;R1305加入52 ml ;R1306与R1307每瓶加入104 ml 无水乙醇

    Buffer RC1使用前加入终浓度为1%的巯基乙醇,如1ml Buffer RC1加入10μl巯基乙醇。

    需自备器材

    无水乙醇    1.5ml离心管    水浴    离心机

    操作步骤

    1. 0.3-0.5g粪便置于2ml离心管中,加入0.4g Glass Beads,再加入500μl Buffer RC1注意加入5μl巯基乙醇) 100μl Buffer RC2以及500μl水饱和酚(需自备)。涡旋器高速震荡3-5min

    注意:对含水量丰富的样品,可以预先离心除去部分水分后再称去样品。Buffer RC2是我司独特的腐殖酸除去剂,100μl对大部分样品来说足以有效除去腐殖酸等抑制因子。对一些腐殖酸含量特别丰富的土壤, Buffer RC2的量可以适当增加,但不能超过250μl,否则会严重影响RNA的得率。

    2. 加入200μl Buffer RC3RC3如有沉淀37℃水浴完全溶解后再用),涡旋5-10分钟。

    3. 加入200μl氯仿涡旋。12000 rpm(~13000×g)离心5钟,转600μl上清到1.5ml离心管中,加入180μl Buffer RC4混匀。

    注意:转移上清时确保不要吸取到沉淀,转移的上清量最好不超过80%。

    4. 冰上放置5min12000 rpm(~13000×g)离心5钟。 转移上清到新的1.5ml离心管中。

    5. 加入二分之一上清体积的 Buffer RC5与与等体积的无水乙醇,充分混匀。如:向500μl 上清中加入250μl Buffer C3与500μl无水乙醇。

    6. 把上述混匀的液体转移到GBC分离柱上。10,000×g离心30秒以结合RNA,弃去滤出液体。

    纯化柱最大容量为750μl,如果混合液大于750μl,请分两次过柱。

    7. GBC吸附柱中加入500μl Wash Buffer I 离心30秒,弃废液。

    8. GBC吸附柱 中加入600μl Wash Buffer II12,000 rpm (~13,400×g ) 离心30 秒,倒掉废液,GBC吸附柱放入收集管中。

    注意:Wash Buffer II使用前请先检查是否已加入无水乙醇)

    9.GBC吸附柱 中加入600μl Wash Buffer II12,000 rpm (~13,400×g ) 离心30秒,倒掉废液,将GBC吸附柱放入收集管中。

    10. 12,000 rpm(~13,400×g)离心1分钟,倒掉废液,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

    注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的残留会影响后续的实验

    11. GBC吸附柱转入一个新的离心管中,加30-100μl RNase-free Water,室温放置2 分钟,4℃ 12,000 rpm (~13,400×g)离心1分钟。

    注意:洗脱缓冲液体积不应少于30μl,体积过小影响回收效率。且RNA 应保存在-70℃,以防降解。如果想提高RNA 得率,可重复上步操作一次,合并两次得到的溶液。


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